设计引物为什么一定要在保守序列内设计？？保守序列在ORF内，在保守序列内设计引物怎么得到能够完整表达的核苷酸序列？？得到有功能的蛋白质？
一般对于已知序列的PCR当然不要从保守序列来设计
引物，只要从开放可读框前后开始设计就行了。需要从保守序列设计引物的情况一般是两种，一是某个物种里面某个特定基因序列从未被分离过，但其进化关系相近的物种有分离出这个基因的同源基因，这样我们可以调取这些同源基因，对比查看它们的保守序列设计引物，然后就利用这对引物就可以获得这个物种的这个基因的部分序列。然后再设计RACE获得全长序列。另外一种差扮枣情况则是设计通用引物，很多情况下我们并不需要知道某些基因的全部信息，只要知道他缺闷有没有，这种时候就可以根据保守序列设计通用引物。这样的引物可虚拆以跨越很多物种获取同一个基因的信息，而不需要根据某特异的物种额外设计多种引物。
没有要求必须在什么保守序列内设计啊 如果是要设计过表达的引物 只要保证包含了完整的CDS区就可以啦