分享完噼里啪啦牛皮的内容，记住关键词:菌种传代保存，菌种的传代与保存，菌种传代保存时间，菌种传代保存及菌液制备视频讲解，菌种的传代与保存时间。微生物学领域的质量控制由于其复杂性和局限性，与传统的理化项目相比，操作不便，难以判断。市排水办监测站在微生物领域的质量控制也一直是空白。在当前疫情的影响下，开展微生物学领域的质量控制，提高微生物项目判定的准确性和可靠性显得尤为重要。
8月起，监测站质监所接手微生物检测项目。通过文献检索和与其他检测机构沟通，决定从标准菌株的传代入手，同步进行培养基的验收，推动建立符合监测站实际情况的微生物学领域质量控制体系。菌种是微生物检测的基本材料，培养基是微生物培养和检测的重要试剂。标准菌株通过培养基的情况直接决定了微生物项目检测的质量。
首先，质量控制室建立了“标准菌株通道作业指导书”和“标准菌株管理规定”。通过这些指导性文件的建立，使标准菌株传代和培养基质量控制有章可循，有据可依。其次，对枯草芽孢杆菌和大肠杆菌两种标准菌株进行传代。菌株继代培养的实验操作复杂且具有挑战性，一般每个菌株都要继代培养三次。为了防止菌株变异，最多可以繁殖到五代。继代工作的第一步是通过冻干管复活0代菌株，溶解并钻管，得到1代标准菌株悬液，用于复活和欣赏。第二步，选择第一代菌悬液进行营养琼脂平板划线，将第一代菌悬液用于复活的试管和平板放入37℃的生化培养箱中培养3天，得到第一代复活菌。同时记录并观察一代菌株的平板菌落生长情况，革兰氏染色后在显微镜下进一步观察菌落形态。第三步，重复第一代菌株的实验操作步骤，培养观察，直至培养出第三代菌株。将后三代菌种转移到标准菌种保藏管中，保存在-20℃冰箱中。至此，标准品系的传代已经完成。最后将冻存的第三代菌种复活得到第四代菌种，并对培养基进行验收。
标准菌株传代和培养基验收的顺利完成，表明监测站微生物场检测数据准确可靠。同时，也意味着该监测站在微生物学领域的质量控制取得了新的突破。质量控制人员对微生物学领域的专业知识有了新的认识，质量控制水平得到了提高，为进一步开展微生物检测领域的质量控制打下了良好的基础。(徐露)
2、菌种的传代与保存，常用菌种的传代与保存方法1、菌种概念和传代
(1)标准菌株:直接从官方菌种保藏机构获得的菌株，至少定义到属或种的水平。通常默认为0代品系。
(2)标准储备菌株:在实验室中转标准菌株一代而获得的一组完全相同的独立菌株。通常是第一代或第二代菌株。
(3)储备菌株:将标准储备菌株转移到第一代得到的培养物。通常是第二代或第三代菌株。
(4)工作菌株:通过将标准储备菌株、储备菌株或标准物质(已认证或未认证)转移至下一代而获得的菌株。通常是第3-5代细菌。
传代:每一次传代培养都是一个传代过程，液体、固体或半固体培养基均可。
注:菌种只能自上而下传递，储备菌种可以作为工作菌种，工作菌种不能作为储备菌种。一般实验室使用的工作菌株不得超过第五代，除非标准方法中有明确要求，或者实验室能够证明菌株的相关特性没有发生变化。如果在通过的过程中有明显的变异，就不能再用了。
二、菌种保藏的基本原理
使微生物的生命活动处于半永久休眠状态，即把微生物的新陈代谢限制在最低限度。干燥、低温、空气隔绝是保证这种状态的主要措施。创造干燥、低温、空气隔绝的外部条件是微生物菌种保藏的基本技术。
3.菌种保存的常用方法(1)斜面保存法操作方法:将营养琼脂(或其他适宜的琼脂培养基)煮沸溶解，然后分装于试管中，灭菌，在长斜面上固化，在培养基的斜面上挑取菌落并划线，在适宜的条件下培养。培养结束后，保存在2-8℃(有些菌株在4℃会自溶，如铜绿假单胞菌。副溶血弧菌等。，可在室温下保存)。这种方法是实验室和工厂菌种室常用的保存方法。操作简单，使用方便，但是容易变异。反复传代培养会改变微生物的代谢，影响其性质，污染杂菌。霉菌、酵母菌、放线菌、孢子一般2-4个月保代一次，细菌一般每月保代一次。
斜面保存方法
(2)液体石蜡保存的操作方法:将营养琼脂(或其他适宜的琼脂培养基)加热溶解，分装于试管中，灭菌后置于长斜面上，或用半固体培养基加热煮沸溶解后分装于小试管中，灭菌后置于直立位，挑出菌落“之”字形接种于培养基斜面上或穿刺于半固体培养基管中，置于适宜条件下培养。培养结束后，在培养基表面覆盖一层无菌液体石蜡，置于2-8℃的冷库中保存。液体石蜡一方面可以防止培养基中水分蒸发造成菌种死亡，另一方面可以防止氧气进入，从而减弱代谢。与倾斜保存相比，这种方法的保存期限更长，霉菌、酵母菌、放线菌、孢子可保存1-2年甚至更长时间，大部分无孢子菌也可保存1年以上。(3)甘油冻存的操作方法:将菌落挑入液体菌种保藏管(市售液体菌种保藏管中已加入甘油，可直接使用；如果自己制作，可以在冻存液中加入15%-50%的甘油，或将菌液与无菌甘油溶液混合)，用移液枪吹匀，制成109CFU/mL左右的菌悬液，放入超低温冰箱或液氮罐中冷冻保存(霉菌可以挑取孢子冷冻保存，保存温度越低效果越好，建议长期保存在-70℃以下)。该方法适用范围广，操作简单，效果好，无变异。-20℃保存时间短，一般在一年左右，在-70℃以下可保存较长时间，一般至少两年，有的菌株甚至可保存十年以上。注意事项:反复冻融容易导致菌种死亡。中国药典中规定融化的菌种保存管不能再次冷冻。
液体菌种保存管(含甘油)
(4)真空冻干保藏法通常以牛奶为载体，加入菌种制成菌悬液，用真空冻干机脱水冻干制成冻干粉。与其他保藏方法相比，真空冷冻保藏法更容易保存菌种的活力，延长保藏时间。适用于98%以上菌种的保存，但操作复杂，一般实验室难以使用。(5)载体保存法:用沙子、滤纸、硅胶等材料作为载体吸附菌种，然后用五氧化二磷干燥保存。保存时间长，应用广泛，但一般实验室通常不易操作。(6)瓷珠保藏法瓷珠菌种保藏管是实验室中用于菌种保藏的容器。管内有凹孔的小瓷珠用于细菌吸附和保存。甘油可以作为防冻保护剂，减少冷冻过程中形成的冰晶。当瓷珠菌种保藏管置于-20℃或-80℃时，可创造干燥、低温、营养缺乏的环境，使菌种在长期保藏前保持“休眠”状态(视不同菌种和保藏情况而定，保藏方法:在平面或斜面上挑取新鲜纯培养物，置于菌种保藏管中，制成浊度约为3-4麦克奈尔比的菌悬液， 盖上盖子倒置几次使细菌乳化，用无菌移液管吸干菌种保存管中的液体，只留下瓷珠，拧紧保存管，迅速放入-20℃或-70℃冰箱中。 使用方法:在无菌条件下，用灭菌针或镊子取出一个小瓷珠，直接用小瓷珠作平板划线或加入到合适的液体培养基中，然后在合适的条件下培养。
瓷珠菌种保存管
四、实验室常用菌种的保存方法
(1)短期和中期贮存:葡萄球菌、沙门氏菌、埃希氏菌、志贺氏菌、假单胞菌、假单胞菌、李斯特菌等。，可用营养琼脂斜面或TSA斜面在4℃保存(铜绿假单胞菌在4℃会自溶，可常温保存)，一般可保存1-3个月。白色念珠菌、酵母菌、霉菌等。可在夏克氏葡萄糖琼脂斜面上4℃保存，一般保存3-6个月。生孢梭菌和产气荚膜梭菌可在疱肉培养基中培养，然后在4℃保存，可存活数月至一年以上。(2)长期保存:对于大多数细菌和真菌，普通实验室可选择瓷珠保存法或甘油保存法在-20℃以下或-70℃以下保存，温度越低保存时间越长。(注:保存霉菌时，只需挑孢子冷冻即可；推荐甘油保存法保存厌氧菌，避免反复冻融；甘油冻存保存弯曲杆菌、螺杆菌、嗜血杆菌等细菌时，添加5%-10%去纤维蛋白羊血为佳。
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